REAL-TIME-PCR

در PCR Time-Real جهت بررسی بیان یک ژن، ابتدا با کمک آنزیم ترانس کریپتاز معکوس مولکولهای RNA را به cDNA تبدیل میکنند. پس از پایداری مولکول مورد سنجش، وارد سیکلهای PCR Time-Real شده و بیان مورد مطالعه قرار میگیرد. دستگاه PCR Time-Real از یک سیستم اپتیکی بهره برده که توسط آن میزان DNA هر نمونه محاسبه میگردد. زمانی که cDNA سنتز شد، پس از آماده سازی نمونه جهت ورود به سیکلهای پلیمریزه شدن، به نمونه DNA رنگ Green SYBR اضافه میگردد. این محصول دارای ویژگی فلورسنتی میباشد و موجب رنگ شدن DNA میشود. در سیکلهای پلیمریزاسیون به ازای ساخته شدن رشتههای DNA جدید، رنگ سایبر گرین به رشته متصل میشود و دستگاه خوانش فلورسنتی را شروع میکند و برای هر نمونه یک گراف تکثیر ترسیم میکند. هر نقطه از گراف تکثیر نشان دهنده میزان اتصال SYBR Green به رشته DNA میباشد و در نهایت گراف که در نمایشگر متصل شده به Time-Real PCR به نمایش در آمده، به آستانه خود میرسد. این میزان نشان دهنده میزان DNA بیان شده در هر نمونه میباشد. کاربرد دستگاه: بررسی بیان ژن به روش سایبرگرین، شناسایی پاتوژن و تعیین ژنوتیپ به روش -real Taqman PCR time و تعیین بار ویروسها )load viral)